Propiedades Inmunomodulatorias Comparativas de la Combinación de Adyuvantes Chitosán- MDP luego de la Inmunización Intranasal o Intramuscular

• AUTOR : Moschos SA, Bramwell VW, Somavarapu, S y Oya Alpar H
• TITULO ORIGINAL : Comparative Immunomodulatory Properties of a ChitosanChitosán-MDP Adjuvant Combination following Intranasal or Intramuscular Immunisation
• CITA : Vaccine 23(16):1923-1930, Mar, 2005
• MICRO : Este abordaje podría facilitar el uso de adyuvantes que antes eran se consideraban inapropiados o ineficaces para una determinada vía de administración.

Introducción

Las sub-unidades de las vacunas presentan diversas ventajas diversas en el contexto del desarrollo de nuevas vacunas nuevas, como la generación de respuestas inmunes de gran especificidad mediante la inclusión de antígenos heterólogos altamente purificados y adyuvantes bien caracterizados, que permiten la administración no invasiva y minimizan los riesgos. En tal sentido, algunos adyuvantes recientemente descriptos y caracterizados recientemente cumplen una importante función importante.

Los sistemas de transporte empleados como adyuvantes facilitan el acceso antigénico mediante mejores mayor absorción mucosa y mejor transporte transepitelial. También facilitan el reconocimiento celular específico por medio de la interacción con el receptor, al tiempo que mantienen la integridad antigénica y promueven un incremento en la actividad inmune, antígeno y específica mediante la mayor re-captación antigénica por las células que presentan antígenos. Por otra parte, el uso de inmunomoduladores facilita el desarrollo de una respuesta inmune específica, de importancia en la inmunidad protectora contra infecciones intra-celulares como el HIV, el síndrome respiratorio agudo severo (SARS) y la tuberculosis.

Por lo tanto, existen, por lo tanto, posibilidades bien definidas de combinar adyuvantes con funciones separadas pero complementarias. Tales combinaciones pueden revelar las propiedades inmunomoduladoras de compuestos previamente antes considerados como inmunológicamente inactivos.

El di-péptido muramilo (MDP) es un adyuvante sistémico fuerte del que se necesitan cantidades relativamente grandes, administrado en su forma natural por la vía nasal, para generar una respuesta inmune considerable. Su administración en su forma natural, se necesitan cantidades relativamente grandes por la vía nasal, para generar una respuesta inmune considerable. Su administración conjunta con chitosán resulta en un incremento en la proliferación celular en los cultivos de esplenocitos, y en una mayor producción de IL-2 en respuesta al estímulo antigénico. En este artículo, los autores investigan en forma comparativamente los efectos sobre la inmunogenicidad de la ureasa antígeno H. pylori recombinante (rUre) mediada por MDP, chitosaán o su combinación, al ser administradas por vía intra-nasal o intramuscular.

Materiales y métodos

Esquema de inmunización. Se emplearon grupos de 5 ratones femeninos, de 8 a 9 semanas de vida. En los días 1 y 56 se realizó la inmunización; la dosis, preparada en forma aséptica, contenía 10 microgr de rUre, con 10 microgr de MDP y/ o 0.22% m/ ve de cloruro de chitosáan. La inmunización nasal se realizó mediante instilación de 10 microl por cada narinafosa nasal; la intramuscular, por la inyección de 50 microl en el miembro inferior.

Procedimientos séricos y tisulares. Se recolectaron muestras de sangre hasta el día 168, final del experimento, el día 168. Estas muestras se centrifugaron y el suero se almacenó.

En el día 168 se tomaron muestras de materia fecal, de las cuales, mediante sucesivas centrifugaciones sucesivas, se obtuvo el sobrenadante para ser almacenado. Por último, luego de sacrificar a los animales al final del estudio, se obtuvieron muestras de tejidos intestinales que también fueron procesadas se procesaron hasta la obtención de un claro sobrenadante claro para su almacenamiento.

Análisis del suero y homogenizados intestinal y fecal para estimación de la respuesta inmune. La generación de inmunidad humoral se evaluó mediante técnicas de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) para la detección de inmunoglobulinas específicas contra la rUre. Se determinaron los títulos de IgG, IgG1, IgG2a e IgA en las muestras previamente almacenadas previamente. Para la cuantificación de IgG e IgA intestinales y fecales, se realizaron comparaciones entre compararon los valores de las muestras y los hallados en especíimenes libres de inmunización.

Estudios de cultivos esplenocelulares primarios. El perfil inmunológico de las respuestas generadas se estudió en mayor detalle mediante sistemas de cultivos esplenocelulares primarios. Se sembraron células esplénicas, a las que se agregó rUre diluida. En forma paralela, se cultivaron células de ratones femeninos libres de inmunización en combinación con concanavalin-A. Para evaluar la respuesta proliferativa, antígeno y específica, , luego de 72 horas de incubación, se agregó timidina tritiada, y se extendió la incubación por 24 horas. Se cuantificaron los niveles de timidina tritiada mediante procedimientos estándar. También se estimó la producción de citoquinas luego del estímulo antigénico. Por último, se determinaron los valores de la respuesta inmune mediante las mencionadas técnicas de ELISA mencionadas.

Resultados

Comparación de la antigenicidad de la rUre de acuerdo con la vía de administración

Los hallazgos de los autores sobre la antigenicidad parenteral y mucosa de la rUre, que se evidenciada por los niveles de inmunidad humoral generada, confirman comunicaciones previas. Mientras que la administración nasal no indujo seroconversión inmediata, los títulos de anticuerpos alcanzaron altos niveles altos una semana después de la estimulación, y se mantuvieron a niveles similares a los logrados mediante inmunización intramuscular por, al menos, 3 semanas. Hacia el día 168, los anticuerpos aún se detectaban tanto en el grupo nasal como en el parenteral; en el último, los niveles de inmunidad humoral eran fueron superiores.

Las altas concentraciones de antígeno parecían tener un efecto inhibitorio sobre la repuesta esplenocelular antígeno,- específica y combinada. A niveles no tóxicos del antígeno estimulante, la vía intramuscular parecía ser superior a la intranasal en términos de proliferación esplenocelular.

El MDP no promueve la antigenicidad de rUre, independientemente de la vía de administración

La respuesta sérica de anticuerpos de los grupos que recibieron rUre intramuscular o intranasal combinada con MDP, indican que este adyuvante tuvo un limitado efecto limitado en la respuesta inmune.

Los autores refieren observaron, que al comparar las vías de administración, observaron que en tanto la administración intranasal resultó en respuestas más inmediatas,: los que se vacunaron el día 49 los que habían sido vacunados en forma parenteral respondieron a niveles significativamente más altos. Hacia el día 84, las repuestas en los ratones inmunizados en forma intramuscular eran menos acentuadas que en el grupo intranasal.

Por último, las respuestas en los esplenocitos derivados de ratones inmunizados con rUre y adyuvante, indican que la administración del adyuvante resulta en una marcada reducción marcada de su capacidad proliferativa, antígeno- y específica, comparadao con la administración aislada de antígeno.

Comparación de la capacidad adyuvante del Ccloruro de chitosaán + MDP de acuerdo con la ruta de administración

La administración de la combinación cloruro de chitosán + MDP en forma intramuscular o intranasal no generó una respuesta tan inmediata como cuando el antígeno se administró sin adyuvantes. Hacia el día 49, los ratones estimulados por vía nasal presentaban títulos de anticuerpos considerablemente elevados comparado con el grupo en que se utilizó sólo el MDP como adyuvante. En el grupo intramuscular, esta combinación de adyuvantes produjo niveles de IgG sérica significativamente mayores comparados con la inmunización con antígeno libre o con MDP; asimismo, la respuesta fue superior a la obtenida mediante inmunización nasal con la misma combinación de adyuvantes.

Hacia el día 84, la significación de la combinación de cloruro de chitosaán + MDP se hizo evidente. Hacia eAl final del experimento, las respuestas séricas de IgG eran significativamente comparables comparaban en forma significativa entre todos los grupos, independientemente de la vía de administración.

Al mismo tiempo, los homogenizados intestinales de los ratones inmunizados de manera intranasalmente exhibieron niveles comparables de IgG, pero la IgA fue sólo detectable cuando se utilizó como coadyuvante la combinación cloruro de chitosán + MDP.

Con respecto a lLa IgG fecal, sobre todo esta se detectó fundamentalmente en los grupos chitosán y chitosán + MDP.

Discusión

En la actualidad, la vacunología se benefició enormemente debido a los avances en la comprensión del modo de actuar de los adyuvantes. Es significativo el descubrimiento de los receptores de reconocimiento de patrón PRP (PRPreceptores de reconocimiento de patrón), que median una discreta respuesta inmune, innata, discreta y adaptativa a los patrones moleculares asociados con patógenos PAMP (PAMPpatrones moleculares asociados con patógenos). La expresión de los PRP parece estar restringida de acuerdo con el tipo celular; por lo tanto, dirigir las acciones contra los PRP ofrece la oportunidad única de generar respuestas inmunes a medida.

El MDP es un reconocido adyuvante reconocido derivado de la pared celular del Mycobacterium tuberculosis. Se han propuesto diversas variantes diversas de esta molécula, pero la respuesta inmune que generan parece diferir difiere de acuerdo con la modificación de que se trate. Algunos informes recientes contienen Lla respuesta réplica a estas diferencias en la respuesta inmune generada parece estar contenida en algunos informes recientes que y sostienen que el MDP es un PAMP reconocible en forma intra-celularmente con posterior generación posterior de respuestas pro-inflamatorias. Se esperan que modificaciones en el MDP que influyan en la respuesta inmune a desencadenarse.

En su estudio, lLos autores detectaron diferencias en la respuesta animal a la rUre cuando se la administró con MDP como adyuvante ay cuando el adyuvante era una combinación de MDP y chitosán. Asimismo, la vía de administración mostró una elevada asociación elevada con la extensión y el tipo de respuesta. En tanto que la administración de estos adyuvantes no produjo ningún efecto positivo, luego la vacunación intramuscular, y la administración intranasal de chitosán combinado con MDP resultó en respuestas elevadas de IgG sérica y en una gran proliferación de los esplenocitos. En tanto Como se reconoce que el chitosán produce efectos específicos sobre el epitelio mucoso, los autores creen que esa es la particularidad responsable de las diferencias observadas cuando se lo administró por vía intranasal, tanto solo como en combinación con MDP.

El chitosán puede funcionar como un adyuvante en sí mismo, y así como favorecer la acción de otro adyuvante.

Algunos indicios indican revelan que la administración conjunta del chitosán y el MDP como adyuvante parenteral resulta en una reducción del efecto adyuvante del chitosán, lo cual sugiere que en tal contexto, mantienen una relación antagónica. En conclusión, estos los hallazgos de los autores corroboran otras comunicaciones sobre el potencial adyuvante de los inmunomoduladores en determinadas circunstancias, como cuando se combinan con un segundo adyuvante de función distinta y complementaria. Este abordaje podría facilitar el uso de adyuvantes de los que previamente se creían que eran inapropiados o ineficaces para una determinada vía de administración. Por otra parte, la vía de administración cumple una importante función importante sobre los precisos efectos precisos de una combinación adyuvante, dado que se relaciona con el modo de acción individual de la combinación de adyuvantes así como y con su relación exacta en cada medio de inmunización.

Especialidad: Bibliografía - Farmacología